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NanoDrop One是一款功能強大、操作簡便的微體積樣品分析儀器,它革新了傳統光度計需要比色皿的繁瑣操作,僅需1-2 μL的樣品即可完成快速、準確的測量。它集成了多種檢測模式于一身,是分子生物學實驗室得力工具。以下是其核心的檢測功能:
一、賽默飛NanoDrop One 核酸定量
1、檢測類型:雙鏈DNA (dsDNA), 單鏈DNA (ssDNA), RNA, 寡核苷酸。
原理:利用核酸在260 nm波長處有吸收峰的特性(根據朗伯-比爾定律)進行定量。
2、關鍵指標:
濃度:直接給出樣品濃度(ng/μL)。
純度:通過計算吸光度比值來評估樣品純度:
A260/A280比值:用于評估蛋白質污染。理想值:~1.8 (DNA), ~2.0 (RNA)。比值偏低表明可能存在蛋白質污染。
A260/A230比值:用于評估鹽類、胍鹽、EDTA或碳水化合物等污染。理想值通常 >2.0。比值偏低表明存在有機溶劑或鹽類殘留。
3、優勢:無需稀釋,直接測量原始樣品,快速(數秒出結果),節省珍貴樣品。
二、賽默飛紫外-可見全光譜掃描
NanoDrop One可以生成190nm至840nm的完整光譜圖,這對于樣品鑒定和純度評估至關重要。
應用:
1、鑒定未知樣品:通過光譜形狀判斷是核酸、蛋白還是其他化合物。
2、深入評估純度:全光譜可以揭示其他污染物(如苯酚、胍鹽)的特征吸收峰,這些是260/280和260/230比值無法全面反映的。
3、檢測顆粒物散射:光譜基線抬升通常意味著樣品中存在不溶性顆?;驓馀?。
三、蛋白質定量
NanoDrop One內置了多種常用的蛋白質定量方法(A280模式)。
1、檢測原理:
A280直接檢測:利用蛋白質中的色氨酸 (Trp) 和酪氨酸 (Tyr) 在280 nm處的吸收來定量。該方法需要已知消光系數。
比色法方法:儀器內置標準曲線,可用于:
微BCA法 (Micro BCA):靈敏度高,抗去垢劑干擾能力強。
Bradford法:快速,但易受去垢劑干擾。
2、優勢:與核酸一樣,僅需微量樣品即可快速獲得濃度結果(mg/mL)。
四、賽默飛熒光定量
這是一個可選配的功能模塊,大幅擴展了NanoDrop One的應用范圍,特別是對低濃度樣品的檢測。
1、原理:使用特定的熒光染料,通過激發光激發染料發出熒光,檢測熒光強度來定量,其靈敏度比紫外吸收法高幾個數量級。
2、應用:
超低濃度核酸定量:如使用Quant-iT™ dsDNA HS 或 RNA HS assays,可檢測低至 pg/μL 級別的核酸,適用于下一代測序 (NGS) 文庫質檢、單細胞分析等。
特異性檢測:某些染料只對特定類型的核酸(如雙鏈DNA)有強熒光信號,特異性更好。
五、賽默飛NanoDrop One的突出特點:
1、智能化與自動化:配備觸摸屏和智能軟件,可自動選擇光程、保存光譜數據、生成報告。
2、樣品留存:測量后的樣品可以回收,用于下游實驗。
3、快速高效:每個樣品測量僅需幾秒鐘,無需清洗比色皿,極大提升了工作效率。
總而言之,賽默飛NanoDrop One不僅僅是一臺核酸濃度儀,它是一個功能高度集成的微體積全光譜分析平臺,能夠滿足現代生命科學實驗室對樣品質量控制的多樣化需求。